乳酸菌广泛存在于食品、乳品等行业的生产环境中，其数量与活性直接影响产品品质、风味及保质期，同时也能反映生产环境的卫生管控水平。生产环境中乳酸菌的测定，是企业实现微生物精准管控、保障产品合规性的关键环节。本文结合行业标准与实践经验，参考美正生物相关检测产品与技术，详细介绍生产环境中乳酸菌的测定方法、操作流程及核心注意事项，为相关企业提供可落地的检测参考。

一、生产环境中乳酸菌测定的核心意义

生产环境中的乳酸菌多为兼性厌氧或微需氧微生物，广泛分布于生产车间的设备表面、操作台、空气、原料及成品接触面等区域。开展乳酸菌测定工作，对企业生产管理具有重要现实意义：

• 保障产品质量与稳定性

适量的乳酸菌在食品发酵中可提升产品风味，但生产环境中乳酸菌过量繁殖或杂菌污染，会导致产品酸败、风味异常，甚至缩短保质期。通过精准测定，可控制乳酸菌数量在合理范围，确保产品质量稳定。

• 评估生产环境卫生状况

  乳酸菌的检出数量的变化，能直观反映生产环境的清洁消毒效果、设备维护水平及操作规范性。若测定结果异常，可及时排查污染源，优化卫生管控流程，降低产品污染风险。

• 符合行业标准与合规要求

       食品、乳品等行业的国家及行业标准，对生产环境中的微生物指标有明确限值要求。乳酸菌作为重要的微生物检测项目，其测定结果是企业合规生产、产品抽检合格的重 要依据。

二、生产环境中乳酸菌的核心测定方法

结合生产场景的实用性与检测准确性，目前生产环境中乳酸菌的测定主要分为传统培养法与快速检测法，其中快速检测法因操作便捷、效率高，被广泛应用于企业日常检测，参考美正生物Premium系列乳酸菌测试片的相关技术，具体方法如下：

• 传统培养法

传统培养法是乳酸菌测定的经典方法，核心为平板计数法，符合GB 4789.35-2016等国家标准，适用于对检测精度要求较高的场景，具体流程如下：

1. 样品采集：针对生产环境的设备表面、操作台、空气等不同场景，采用无菌拭子、空气采样器等工具采集样品，确保样品具有代表性，采集后及时送检，避免乳酸菌活性下降。

2. 样品处理：参照标准方法，将采集的样品放入无菌缓冲液中，通过均质器充分混匀，制成系列10倍稀释的样品匀液，确保乳酸菌均匀分散，避免菌团影响计数准确性。

3. 接种培养：取适宜稀释度的匀液，接种于MRS培养基、MC培养基等选择性培养基中，置于36±1℃的厌氧或微需氧环境中培养48-72小时，为乳酸菌生长提供适宜条件。

4. 计数与判读：培养结束后，计数平板上形成的乳酸菌菌落数，选取菌落数在30-300个的平板进行计算，最终换算出每单位样品中的乳酸菌数量（CFU）。该方法权威可靠，但操作繁琐、耗时较长，适合实验室精准检测。

•  快速检测法（便捷高效，适合日常管控）

快速检测法以预制型测试片为核心，参考美正生物Premium系列乳酸菌测试片（型号LR1312）的技术特点，简化了检测流程，大幅缩短检测时间，适合企业生产现场的日常监测，具体要点如下：

1. 产品特性：美正生物Premium系列乳酸菌测试片为预制型培养基系统，无需自行配制培养基，25片/包，储存于2-8℃避光冷藏环境，保质期18个月，开封后需在1个月内用完，操作便捷且稳定性强。

2. 操作流程：样品处理参照GB方法，制成系列稀释匀液后，取1mL匀液接种于测试片上，正置放入36±1℃环境中培养48小时，无需严格控制厌氧环境，有氧或厌氧条件均可。

3. 结果判读：培养后，乳酸菌会形成红色或蓝绿色至蓝色菌落，部分菌落周围会出现黄色晕圈，可通过目视或菌落计数器计数，计数范围建议控制在30-300CFU，快速得出检测结果。

此外，流式细胞术、实时定量PCR等方法也可用于乳酸菌测定，流式细胞术可在数分钟内完成活菌与死菌的区分计数，实时定量PCR可精准检测特定乳酸菌的基因拷贝数，但此类方法设备成本较高，适合高端检测需求。

三、生产环境中乳酸菌测定的标准操作流程

无论采用哪种检测方法，都需遵循标准化操作流程，才能确保检测结果的准确性与重复性，结合行业实践与美正生物检测产品的使用规范，具体流程如下：

1.  前期准备：无菌控制是前提

• 器具准备：培养皿、移液管、均质杯、拭子等器具需彻底灭菌，避免残留杂菌或抑菌物质，影响检测结果；

• 环境准备：操作需在超净工作台或无菌操作间内进行，操作人员需做好手部、衣物消毒，避免人为污染；

• 试剂与产品准备：提前准备好培养基、稀释液（无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液），若使用美正生物乳酸菌测试片，需提前将测试片恢复至室温后再开封，避免冷凝水影响检测。

  2.样品采集与处理：确保样品代表性

• 采集原则：按“随机抽样、均匀分布”的原则，覆盖生产车间的关键区域（如原料入口、操作台、设备接触面、成品存放区），每个区域至少采集3个平行样品；

• 样品处理：固体或半固体样品（如设备表面拭子）需加入无菌缓冲液，经均质器充分混匀；液体样品直接进行系列稀释，每稀释一次更换无菌吸管，确保稀释均匀。

 3.接种与培养：控制关键条件

• 接种操作：接种量需精准（常用1mL），涂布接种时需确保菌液均匀分布，倾注接种时需控制培养基温度在50℃以下，避免烫死乳酸菌；

• 培养条件：传统培养法需控制厌氧或微需氧环境，温度保持在30-37℃（乳杆菌属）或35-39℃（链球菌属），培养时间48-72小时；快速检测法按测试片要求控制温度和时间，无需额外控制氧气环境。

4.结果判读与记录：规范准确

• 判读标准：严格区分乳酸菌菌落与杂菌菌落，乳酸菌菌落多为圆形、边缘整齐，结合染色或测试片判读标准（如美正生物测试片的颜色特征），避免误判；

• 记录与分析：准确记录每个样品的菌落数、稀释倍数，计算出乳酸菌含量，对比行业标准和企业内控标准，分析检测结果异常原因，及时优化生产管控措施。

  
  

四、生产环境中乳酸菌测定的注意事项

乳酸菌对环境敏感，检测过程中的每一个环节都可能影响结果准确性，结合美正生物检测产品的使用经验，需重点关注以下几点：

1. 样品保真：避免乳酸菌活性变化

样品采集后需在2小时内送检，冷藏储存（4℃左右），避免室温放置过久导致乳酸菌死亡或增殖；样品储存过程中需密封，防止杂菌污染。

   2. 无菌操作：杜绝外源污染

操作过程中严格遵循无菌原则，器具灭菌彻底，操作环境洁净，避免空气中的杂菌、操作人员的人为污染，同时避免稀释液、培养基残留抑菌成分。

   3. 操作规范：控制细节误差

• 稀释过程中，每级稀释后需用涡旋振荡器充分混匀，避免菌液分布不均；

•  接种量需精准，计数时选取菌落数在30-300个的平板，平行样品菌落数差异过大时，需舍弃异常平板；

• 使用美正生物乳酸菌测试片时，揭开上膜时不要触碰培养基检测区域，培养时正置放置，避免叠放过多影响培养效果。

   4. 设备与试剂：保障检测基础

•  培养箱、均质器等设备需定期校准，确保温度、转速等参数准确；

• 培养基、稀释液需在保质期内使用，灭菌后及时使用，避免营养成分失效；测试片需按要求储存，避免阳光直射或高温环境。

  
  

五、总结：科学测定，助力生产管控升级

生产环境中乳酸菌的测定，是企业把控产品质量、保障合规生产的重要手段。传统培养法权威精准，适合实验室精准检测；快速检测法便捷高效，适合企业日常现场监测，美正生物Premium系列乳酸菌测试片等产品，为企业提供了更便捷的检测解决方案。

企业在开展乳酸菌测定工作时，需结合自身生产场景，选择合适的检测方法，严格遵循标准化操作流程，关注每一个细节，确保检测结果准确可靠。通过常态化的乳酸菌测定，及时排查生产环境中的微生物隐患，优化卫生管控流程，才能持续提升产品质量，筑牢生产安全防线。