硝基呋喃类药物是一种抗生素，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌等病原体均有杀灭作用。硝基呋喃类药物因为价格较低且效果好，被广泛应用于畜禽及水产养殖业，以治疗由大肠杆菌或沙门氏菌所引起的肠炎、疥疮、赤鳍病、溃疡病等。由于硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎的副作用，中华人民共和国农业部将硝基呋喃类药物列为在饲养过程中禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，其代谢产物分别为AOZ、AMOZ、AHD、SEM，和蛋白质结合而相当稳定，故常利用代谢物的检测来反应硝基呋喃类药物的残留状况。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、灵敏度高等优点，能减少工作强度。

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。切勿冷冻。

3、洗涤液【配液1】在使用前也需回温。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、加标准品/样本：加标准品或样本50μL/孔到对应的微孔中，再加入呋喃唑酮代谢物酶标物50μL/孔，然后再加入呋喃唑酮代谢物抗试剂50μL/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于25℃避光环境中反应30min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液【配液1】250μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

7、显色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于25℃避光环境中反应15min。

8、测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。