孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒介绍

孔雀石绿在水产中曾广泛应用作为抗菌剂和防真菌剂，特别是在鱼虾养殖业。它可以用于治疗或防止鱼虾疾病，并促进生长。

然而，尽管孔雀石绿在水产业有一定的应用价值，但由于其潜在的危害性，许多国家和地区已经禁止或限制其使用。

孔雀石绿属于有机染料，具有强烈的毒性。以下是一些可能的危害：

1. 环境污染：过量使用或不当处理孔雀石绿的废水会直接排放到水体中，对水生生物和整个生态系统造成污染。

2. 防药物残留：孔雀石绿具有持久性和稳定性，容易在水产中残留，长期食用受污染的水产品可能对人体健康造成潜在风险。

3. 抗药性产生：频繁使用孔雀石绿可能导致病原菌产生耐药性，对其他药物的治疗也产生耐药性，使得治疗更困难。

出于对环境和人类健康的考虑，越来越多的国家和地区已经禁止了孔雀石绿的使用。目前许多国家已经建立了严格的监测体系，确保水产品质量和安全。

孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒原理

采用回接竞争ELISA方法，在酸标板做孔上项包被孔雀 石绿抗原，样本中孔雀石绿和此抗原竞争孔雀石绿抗体(抗试 剂)，加入酶标二抗《酶标物〉与孔雀石绿抗体相结合，经 TMB 底物显色，样本吸光值与孔雀石绿含量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中孔雀石绿的含量。

孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒用途

可定性、定量检测组织鱼肉、虾肉、水样中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结品紫和隐性结晶紫的含量。

孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒参数

试剂盒灵敏度：0.03ppb 

样本最低检测限： 

组织——0.1ppb 

水样——0.3ppb 

回收率： 

组织——90±20% 

水样——100±20% 

精密度：试剂盒的变异系数均小于 10%

孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒样本处理

样本处理前须知

• (a) 实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时需更换 吸头；

• (b)实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实 验器具，以避免污染干扰实验结果；

• (c)实验过程中【请使用红色记号笔】进行标记，勿用蓝色及 黑色记号笔（其成分含有结晶紫与本试剂盒有交叉反应） 进行标记，以免影响检测结果；

• (d)未处理的样本需冷冻环境-20℃保存； (e)处理好的样本应立即用于检测。

  
  

组织（鱼肉、虾肉） 

• 用均质器均质样本； 

• 称取2.0±0.05g样本至50mL聚苯乙烯离心管中，先加入 2 1mL去离子水，再加入10mL乙腈，振荡混匀2min；

• 加入2g样本提取剂A，再加入2g样本提取剂B，最后加入 1mL样本提取液，振荡混匀3min； 

• 室温4000r/min离心5min；

• 取上清液2mL至干燥洁净的离心管中，加入50μL氧化剂， 用移液器吸头反复吸打几次使氧化剂分散【注意更换吸 头】，置于50℃氮气流下吹干；

• 加入1mL样本稀释液，剧烈振荡混匀2min； 

• 取50μL用于分析。 稀释倍数：3 倍

  
  

孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒使用步骤

• 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

• 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中 并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于 2～8℃。【切 勿冷冻】。

• 洗涤液在使用前也需回温。

• 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

• 加标准品/样本：加入标准品或样本 50μL 到对应的微孔中， 然后加入孔雀石绿抗试剂 50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖 板膜盖板后置于 25℃避光环境中反应 15min。

• 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液 250μL/ 孔，充分洗涤 4～5 次，每次间隔 10s，在吸水纸上拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

• 加酶标物：加入孔雀石绿酶标物 100μL/孔，轻轻振荡混匀， 用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境中反应 15min，然后取 出重复洗板步骤 6。

• 显色：加入底物液 A 液 50μL/孔，再加入底物液 B 液 50μL/ 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境中 反应 15min。

• 测定：加入终止液 50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪 于 450nm 处（建议用双波长 450/630nm 检测，请在 5min 内读完数据），测定每孔 OD 值。(若无酶标仪，则不加 终止液用目测法可进行判定)。

• 结果判定 请使用专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、

孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒常见问题

• 试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的 OD 值偏低。

• 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲 线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即 进行下一步操作。

• 每加一种试剂前需将其摇匀。

• 反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。

• 不要使用过了有效期的试剂盒；也不要使用过了有效期的 试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引 起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

• 储存条件 保存试剂盒于 2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板 放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏 感，因此要避免直接暴露在光线下。

• 试剂变质的迹象 发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0 标准 的吸光度（450/630nm）值小于 0.5（A450nm<0.5）时，表示 试剂可能变质。

• 加入底物液 A 液和底物液 B 液后，一般显色时间为 15min 即可。若颜色较浅，可延长反应时间到 20min。反之，则 减短反应时间。

• 浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。

• 该试剂盒最佳反应温度为 25℃，温度过高或过低将导致 检测吸光度值和灵敏度发生变化。