ELISA（酶联免疫吸附试验）根据其操作原理和检测目标的不同，大致可以分为四种方法类型：直接法、间接法、夹心法和竞争法。以下是每种方法的详细介绍：

1. 直接法（Direct ELISA）

原理：

• 将抗原直接固定于固相载体上，随后加入酶标记的一抗（即针对该抗原的特异性抗体，且该抗体已用酶进行标记），一抗与抗原特异性结合后，通过酶催化底物显色来检测目标抗原的存在。

特点：

• 实验步骤少，检测速度快。

• 不需要用到二抗，避免了交叉反应的可能性。

• 但由于抗原不是特异性固定的，样本中的靶蛋白及其他杂质蛋白都可能会与固相载体结合，导致实验背景较高。

• 灵敏度相对较低，因为缺少二抗的信号放大作用。

2. 间接法（Indirect ELISA）

原理：

• 将抗原固定于固相载体上，加入待测样本中的一抗（即针对该抗原的特异性抗体），一抗与抗原特异性结合后，再加入酶标记的二抗（即能够识别并结合一抗的抗体，且该抗体已用酶进行标记），最后通过酶催化底物显色来检测目标抗体的存在。

特点：

• 灵敏度较高，因为使用了酶标记的二抗进行信号放大。

• 实验步骤相对较多，包括一抗和二抗的孵育过程，因此实验周期较长。

• 存在交叉反应的可能性，因为酶标记的二抗可能与样本中的其他非特异性成分结合。

3. 夹心法（Sandwich ELISA）

原理：

• 主要用于检测大分子抗原。将捕获抗体（即针对目标抗原的特异性抗体）固定于固相载体上，加入待测样本中的抗原，抗原与捕获抗体特异性结合后，再加入酶标记的检测抗体（即另一种能够识别并结合目标抗原的特异性抗体，且该抗体已用酶进行标记），最后通过酶催化底物显色来检测目标抗原。

特点：

• 灵敏度和特异性均较高，因为使用了两种特异性抗体进行夹心检测。

• 适用于检测具有两个以上识别位点的大分子蛋白。

• 对配对抗体的要求较高，需要确保两种抗体能够与目标抗原特异性结合且互不干扰。

4. 竞争法（Competitive ELISA）

原理：

• 样本中的抗原（或抗体）与预包被在固相载体上的酶标记抗原（或抗体）竞争性地与未标记的特异性抗体（或抗原）结合。通过比较酶标记抗原（或抗体）与未标记抗原（或抗体）的结合情况，可以评估样本中目标抗原（或抗体）的浓度。

特点：

• 适用于检测小分子物质或药物，因为这些物质通常只有一个识别位点。

• 显色结果与待检抗原（或抗体）的量成反比，即样本中抗原（或抗体）含量越多，显色越浅。

• 灵敏度较高，但整体敏感性和专一性可能较差，因为竞争反应受到多种因素的影响。

综上所述，ELISA的四种方法类型各有其特点和适用范围，在实际应用中应根据具体需求选择合适的方法。

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