草甘膦，化学名称为N-(磷酸甲基)甘氨酸，化学式为C3H8NO5P，是一种内吸传导型广谱灭生性除草剂。由于草甘膦及其代谢物具有强极性，且缺少发色和荧光基团，故普通方法检测难度较大。

现行的国抽方法为《SN/T 1923-2007 进出口食品中草甘膦残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》，样品通过小柱净化，减压旋蒸，调pH，衍生化，用普通的C18柱液质检测即可实现定量。

为满足广大实验老师的需求，美正特开发草甘膦专用柱（产品ID：CSS0453），优化国抽方法，省去旋蒸和调pH等步骤，可实现回收率为 85 - 115%，满足标准检测要求。

实验过程

称量提取

称取1g茶叶置于50 mL离心管中，加10μg/mL同位素内标溶液100 μL，加入20mL水，涡旋2min，超声30 min，4000 r/min，离心5 min。

溶液萃取

量取10mL上层水溶液至另一离心管中

向此水溶液中加入10mL二氯甲烷，手动混匀2min，4000 r/min 离心5min，上层水溶液全部取出，转移至新的离心管中

向此水溶液中加入10mL二氯甲烷，重复萃取一次，之后上层水溶液待净化

净化

用5mL 甲醇，5mL水对草甘膦专用柱进行活化

小柱抽干

取2mL上层水溶液加入到专用柱上，弃去前1mL流出液，收集剩余流出液

衍生

准确吸取1mL净化后的液体，加入400μL 5%硼酸盐缓冲溶液，混匀。

加入150μ 10g/L  FMOC-Cl 丙酮溶液，混匀，室温下避光衍生1h，加入2mL 乙酸乙酯，涡旋混匀1min

在-5℃下，10000 r/min 冷冻离心5 min，取下层水溶液过 0.22 μm Nylon 针式过滤器上机待测。

注：若经过滤后的样品依旧浑浊，可尝试10000 r/min 离心 5 min（-5℃）。

色谱及质谱条件

色谱柱：C18，2.1 × 100 mm，1.7 μm；

流动相A：含乙酸铵的0.1%甲酸水溶液；

流动相B：0.1%甲酸乙腈；

柱 温：35℃；

进样量：20 μL；

流速：0.3 mL/min；

梯度洗脱：

液相色谱梯度洗脱条件

离子源：ESI+；

雾化气压力：45 psi；

电喷雾电压：5500 V；

离子源温度：450℃；

帘气压力：25 psi；

辅助气压力：45 psi；

采集方式：多反应监测(MRM)。

草甘膦残留量质谱参数

实验谱图

50 ng/mL草甘膦残留量标准溶液色谱图

茶叶基质空白色谱图

1 mg/kg茶叶基质加标色谱图

实验结果

由下表可知，采取固相萃取结合液相色谱串联质谱法检测草甘膦残留量，加标回收率为85% - 115%，能够满足标准要求。

茶叶中草甘膦残留量实验结果

（添加水平1 mg/kg，n=3）

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